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白介素2Elisa試劑盒標(biāo)本處理辦法

更新時(shí)間:2022-03-15 點(diǎn)擊量:2268
  白介素2Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中羊白細(xì)胞介素2(IL-2)水平。用純化的羊白細(xì)胞介素2(IL-2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介素2(IL-2),再與HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素2(IL-2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素2(IL-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中羊白細(xì)胞介素2(IL-2)濃度。
  白介素2Elisa試劑盒注意事項(xiàng):
  1.當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
  2.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
  3.一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  4.請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。
  5.如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。
  6.在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
  7.底物請(qǐng)避光保存。
  8.不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
  白介素2Elisa試劑盒標(biāo)本處理辦法:
  實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mo/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
  若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,并注意留存樣本。
  若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測不出的情況。
  使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引|入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。